一. 种公羊饲养管理
种公羊的精液好坏与饲养管理,运动和采精制度是否合理关系很大。只有体制健康才能保证性欲旺盛,精液品质良好。因此,要经常保持种公羊的良好体况。种公羊营养不均衡所造成的过肥、过瘦,后驱无力都会影响采精质量。所以饲养管理种公羊必须给予全价饲料,适当运动,及时护蹄,同时做好畜体和台畜的卫生,定期检疫。每隔半月或一个月用无菌生理盐水加抗生素冲洗公羊的阴筒和包皮,保持局部整洁。
种公羊的日粮特点对种公羊饲料的要求是营养价值高,有足量的蛋白质、维生素和矿物质,且易消化,适口性好。好抱草有苜蓿草、三叶草、青燕麦草等。多汁饲料有胡萝卜、甜菜或青贮玉米等。精料有玉米、高粱、豆饼、麦麸等。优质的禾本科和豆科混合的干草为种公羊的主要饲料,一年四季,应尽量喂给。夏季补以半数青割草,冬季补以适量青贮料。日粮营养不足之数,要补充混合精料。精料中不可多用玉米或大麦,且麸皮、豌豆、大豆或饼渣类补充蛋白抽。配种任务繁重的优秀公羊可补动物性饲料。
二. 采精
1.场地
要有固定的采精场所,以便使种公羊建立交配的条件反射,如果在露天采精,则采精的场地应当避风、平坦,并且要防止尘土飞扬。采精时应保持环境安静。室内附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备,每周消毒一次。
2.采精前准备
找一只健康的、体格大小与公羊相似的发情母羊做台羊。采精时,先将台羊固定在采精架上。台畜的后驱,特别是尾根、外阴、肛门等部位应洗涤,擦干保持清洁。
在牵引公羊到采精现场后,不要使他它立即爬跨台羊,要控制几分钟,再让它爬跨,这样不仅可增强其性反射,也可提高所采取精液质量。采精公羊的羊体保持清洁,采精前须用温水冲洗阴茎,包皮,剪掉过长的阴毛。然后再用灭菌生理盐水冲洗干净。
将各种器械提前消毒、杀菌准备好。假阴道在使用前要洗涤,安装内胎,消毒,晾干,注水,涂润滑剂,调节温度和压力。
注入相当于假阴道内外壳间容积1/2—2/3的温水来维持内部温度,水温约50—55℃,以采精时假阴道温度达40—42℃为目的。注入水和空气来调节压力,应以充气后内胎外口呈现内三角且不凸出为佳。用消毒的液体石蜡或凡士林涂抹假阴道表面增加润滑度,其涂抹度以假阴道长度的1/2为宜。
图 假阴道
3.采精
采精人员用右手握住假阴道后端,固定好集精杯,并将气嘴塞朝下,蹲在台羊的右后侧,让假阴道靠近公羊臀部,当公羊跨上母羊背上的同时,应迅速将公羊的阴道导入假阴道内,切忌用手抓碰摩擦阴茎。当种公羊后驱急速向前用力一冲,即已射精,此时,顺公羊动作向后移下假阴道,并迅速将假阴道竖起,集精杯一端向下,然后打开活塞上的气嘴,放出空气,取下集精杯,用盖盖好送精液处理室待检。
图 羊电子采精器(公羊性欲低下)
4.采精频率
根据种公羊的年龄,体况和季节等影响采集因素,合理安排采精频率,使种公羊的生产潜力得到充分发挥。在良好的饲养管理条件下,1.5岁以后的育成羊,其活重达到成年羊体重的60%~70%时可以开始繁殖配种。24月龄以上的成年公羊每天采精2次,每次射精2次,每次采精时隔在40分钟以上。每6—7天休息一次。
三. 精液检查
1.外观评定
1)射精量:采精后,将精液倒入有刻度的玻璃管中观察即可。
2)云雾运动:用肉眼观察新采的公羊精液,可以看到由精子活动所引起的翻腾滚动极似云雾状。精子的密度越大,活力越强者,其云雾状越明显。
3)色泽:羊的正常精液呈乳白色或乳黄色。
4)精液的气味:刚采的正常精液略有腥味。
2.精子活力
采精后,用滴管搅匀并从中取一滴滴在载玻片上进行镜检,同时利用,密度仪测密度,活力大于等于70%(0.7)的精液进行稀释。显微镜恒温台或保温箱温度不得低于30℃,室温不得低于18℃。
图 ACCUCELL精子密度仪(精确测量)
图 CEROSII计算机辅助精子分析系统(CASA )
四. 精液稀释
1.稀释
1)采集的精液应在30℃条件下做稀释处理。在稀释过程中防止温度突然升降。若迅速降温到10℃以下时,由于冷刺激精子,可能出现冷休克。
2)采精后及时稀释,未经稀释的精液很难存活较长时间。
3)稀释液与精液的温度必须调整一致。
4)稀释时,稀释液沿瓶壁缓缓倒入,不要将精液倒入稀释液中。稀释后将精液容器轻轻转动,混合均匀,避免强烈振荡。
5)如果做高倍稀释,应分次进行,避免精子所处环境剧烈变化。
6)精液稀释后立即进行镜检,如果活率下降,则说明操作不当。
采用OVIxcell新一代羊用无动物源成分精液浓缩稀释液。
根据OVIxcell使用说明,原精采集后送到实验室时用OVIxcell以1:1的比例预稀释。在稀释时稀释液的温度必须与原精温度相同(+/-1ºC)。在做精子检测评估时(活力、浓度等),预稀释后的原精需保存在水浴箱中,温度范围在30-32ºC之间,在水浴箱内时间不能超过10分钟。精子检测后再进行常规稀释。此时,原精需被动降温到室温(20-23ºC),同时在此温度下进行精液细管封装。另外,OVIxcell也适用于在4ºC下进行精液细管封装。稀释后的精子在4ºC下最少要平衡2个小时。
用OVIxcell稀释的精液在显微镜下会呈现非常清晰的图像,非常适合计算机辅助精子分析(CASA)。
细管冷冻:冷冻架上的细管在用液氮蒸汽冷冻时应该距离液氮液面4公分,或者用专业冷冻仪冷冻到-140ºC。自动冷冻仪冷冻过程需要持续约7分钟(0.25ml细管)。
五. 细管包装
将稀释好的精液进行灌装打印。
1)精液灌装前,应将精液摇匀后再缓慢倒入锥形瓶中,精液倒入不要过快以免对精子造成损伤。根据精液量电脑设置0.25ml细管打印数量,编码,打印。
2)打印后要检查羊号和日期。再灌装,封口。检查封口是否完整无误,灌装完计数过程中发现空管或没吸满的要挑出废弃,在分装时不要与精液接触时间太长以免精液温度回升。
六. 降温平衡和冷冻
稀释后的精液,采用逐渐降温法。在1—1.5h内,使稀释精液的温度降到4—5℃;然后再在同温的恒温容器内平衡2—4h。平衡、封装后的细管精液上架码放是应注意细管摆放方向,把棉塞封口端靠近操作者,超声波封口端远离操作者,入Digit-cool程序化冷冻仪时亦应如此放置。每架上放上根类似于细管的标记物,一只羊用同一颜色的标记物,便于识别。如同一架上有不同羊的细管精液,要分开码放,两只羊之间要隔开一些距离,以免混淆。
Digit-cool程序化冷冻仪是全自动冷冻设备。冷冻仪与低温柜应尽量靠近,开启液氮罐阀门把冷冻仪降温4℃,关闭风扇电源,待风扇完全停止后把已排满待冻细管的架子迅速放入冷冻仪,盖严盖子按电脑预先设定好的最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程。如果冻精细管数量不足时,要填充备用塑料管和细管架以保持最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程,确保冻精质量。
精液冷冻过程中要求温度必须直线下降,不得回升。特别是不得进入精子冷冻-15—-50℃的危险温区,使精细胞内出现冰晶而造成精子死亡。
图 Digit-cool程序化冷冻仪羊精液冷冻曲线(理论)
七. 封装
当细管温度降至-144℃时,打开冷冻仪盖子,将冻制好的细管冻精取出快速以25支包装单位装入特制的塑料拇指管内,迅速浸入液氮中待检。细管数量较多的情况下可选用手动计数包装机,以节省时间人力。
图 手动计数包装机
八. 冷冻后活力检测
解冻后在37℃环境下前进运动精子占总精子数的百分率为精子活力。羊冷冻精液的前进运动精子数是评价冻精产品质量的一项重要指标之一。该项指标不仅与受胎率有关,而且关系到冻精产量及优秀种公羊遗传资源的利用率。因此有效精子数要达到国家标准(GB4143-2008)每剂前进运动精子数>1500万个。
解冻温度如同精液冷冻一样,冷冻精液在融解过程中同样也要顺利通过危险区,不会对精子造成冰晶损伤,目前常用解冻温度为38℃左右,解冻10s即可。用纸将解冻后的精液细管擦干,将精液滴在载玻片上进行镜检,经检查合格的入库保存,不合格的废弃。解冻后精液活力应保持在35%以上。
九. 冷冻精液的保存
冻结的细管精液,抽样样品经解冻检查合格后,按品种、编号、采精日期、型号标记、包装,转入液氮罐,贮存备用。
1)冻精应贮存于液氮罐的液氮中,贮存冻精的低温容器应符合GB/T5458标准规定。
2)设专人保管,每周定时加一次液氮,保证冻精始终浸在液氮中。
3)每只公羊的冻精应单独贮存。
4)贮存冻精的容器每年至少清洗一次并更换新鲜液氮。